?、偈箍乖蚩贵w結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。

　?、谑箍乖蚩贵w與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。

　　加入酶反應(yīng)的底物后, 底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。

　　人白介素ELISA試劑盒樣本處理及要求:

　　1、血清:室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細收集上清, 保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

　　2、血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左 右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

　　3、尿液:用無菌管收集,離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100萬 /ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

　　5、組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS , PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4) ,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

　　6、標本采集后盡早進行提取, 提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　7、人白介素ELISA試劑盒不能檢測含 NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。